Thermo Scientific™ Esp3I (BsmBI) (10 U/μl)

Beschreibung

Lambda-DNA verdaut mit Esp3I (BsmBI), 1 % Agarose, 14 Spaltstellen

Herkömmliche Restriktionsendonukleasen sind eine große Ansammlung hochwertiger Restriktionsenzyme, die für den Einsatz in einem der Puffer des Fünf-Puffer-Systems optimiert sind. Darüber hinaus bietet der universelle Tango Puffer Vorteile bei Doppelverdauungen. Alle Enzyme zeigen unter den empfohlenen Puffer- und Reaktionsbedingungen 100 % Aktivität. Um eine konsistente Enzymleistung zu gewährleisten, enthalten Thermo Scientific Restriktionsenzym-Puffer vorgemischtes BSA, welches die Stabilität zahlreicher Enzyme verbessert und Schadstoffe bindet, die in DNA-Proben enthalten sein können.

5'...C G T C T C (N)₁▵...3'

3'...G C A G A G (N)₅▵...5' Bedingungen für 100 % Aktivität:

• [1x Buffer Tango] + DTT: [33 mM Tris-Acetat (pH 7,9 bei 37°C), 10 mM Mg-Acetat, 66 mM K-Acetat und 0,1 mg/ml BSA]+ 1,0 mM DTT
• Bei 37°C inkubieren

Lagerungspuffer:

• Esp3I wird geliefert in: 10 mM Kaliumphosphat (pH 7,4 bei 25°C), 100 mM KCl, 1 mM EDTA, 1 mM DTT, 0,5 mg/ml BSA und 50 % (v/v) Glycerin

Ligation und erneutes Schneiden:

• Nach 50-fachem Verdau mit Esp3I können über 95 % der DNA-Fragmente ligiert und erneut geschnitten werden

Methylierungseffekte:

• Dam: keine Überlappung – keine Auswirkung
• Dcm: keine Überlappung – keine Auswirkung
• CpG: vollständige Überlappung – blockiert
• EcoKI: keine Überlappung – keine Auswirkung
• EcoBI: möglicherweise Überlappung – Auswirkung unbestimmt

Verdauung von Agarose-eingebetteter DNA:

• Es sind mindestens 5 U der Enzyme für den vollständigen Verdau von 1 μg in Agarose eingebetteter Lambda-DNA in 16 Stunden erforderlich

Hinweis:

Das Enzym benötigt DTT. Frisch angesetztes DTT sollte dem Reaktionspuffer zugegeben werden. Esp3I spaltet flussabwärts von seinem Erkennungsort und kann jeden gewünschten 4-Base-5'-Überhang generieren. Diese Funktion ist für das Klonen von PCR-Produkten nützlich.