Invitrogen™ SuperScript™ IV System für Erststrangsynthese

Beschreibung

Optimiert für die Synthese von Erststrang-cDNA aus gereinigter Poly(A)+- oder aus Gesamt-RNA.

Das SuperScript IV-Synthesesystem ist gegenüber dem SuperScript III-basierten System im Hinblick auf Hemmstoff-Resistenz, Aktivität und Reaktionsgeschwindigkeit deutlich verbessert worden, wobei gleichzeitig alle Vorteile des vorherigen System erhalten blieben, einschließlich erhöhter Thermostabilität und äußerst effizienter cDNA-Synthese in voller Länge sowie reduzierter RNase-Aktivität. SuperScript IV sorgt für eine zuverlässige, gleichbleibende und schnelle cDNA-Synthese in Gegenwart von Inhibitoren, die in einer Vielzahl von Proben dazu führen, dass andere aktuell verfügbare RTs nur ineffizient agieren.

Der stark vereinfachte Schritt zur Entfernung genomischer DNA des SuperScript IV Erststrang-Synthesesystems mit ezDNase reduziert die Zeit des gesamten Reverse-Transkriptionsprotokolls drastisch und reduziert mögliche Abweichungen bei der Genexpression aufgrund von RNA-Verlusten oder -Schäden während der konventionellen DNase-Behandlung. Das SuperScript IV Synthesesystem mit ezDNase ist die erste Wahl in Bezug auf Leistung und Flexibilität bei RT-PCR-Anwendungen. Empfohlen für alle RT-PCR-Anwendungen, insbesondere wenn Reproduzierbarkeit und Zuverlässigkeit im Vordergrund stehen und wenn Inhibitoren in der RNA-Probe die cDNA-Synthese beeinträchtigen könnten, was in Genexpressionsstudien zu Verzerrungen führt.

Beide SuperScript IV Erststrang-Synthesesysteme enthalten alle für RT-Reaktionen erforderlichen Komponenten sowie zusätzlich ein Kontrollgen und Primer und bieten Ihnen die Flexibilität die RT-Vorbereitung an die Anforderungen Ihrer Anwendung anzupassen.

Zu den Merkmalen des SuperScript IV Erststrang-Synthesesystems zählen:
• Deutlich verbesserte Resistenz gegenüber einer Vielzahl von Inhibitoren, die die cDNA-Synthese beeinträchtigen können
• Robuste und spezifische cDNA-Synthese für ein breites Spektrum von Probentypen
• Eine schnellere Reverse-Transkriptase-Reaktion, die die Inkubationszeit von > 50 Min. auf 10 Min. reduziert
• Deutlich gesteigerte Prozessivität im Vergleich zu SuperScript III RT
• Vereinfachter Schritt zur Entfernung genomischer DNA (SuperScript IV-Synthesesystem nur mit ezDNase)

Enzymquelle
Aufgereinigt aus E. coli, die das pol-Gen von M-MLV exprimieren, modifiziert zur Erhöhung der Thermostabilität, Halbwertszeit, Prozessivität sowie Inhibitorresistenz und zur Verringerung der RNase H-Aktivität.

Leistungs- und Qualitätskontrolle
Endodesoxyribonuklease-, Exodesoxyribonuklease- und Ribonuklease-Assays sowie Ausbeute und Länge der cDNA.

Einheitendefinition
Eine Einheit SuperScript IV RT ist die Enzymmenge, die benötigt wird, um in 10 Min. bei 37 °C mit Poly(A)-Oligo(dT)_12-18 als Template/Primer 1 nmol Desoxyribonukleotid in säurefällbares Material einzubinden.

Reaktionsbedingungen der Einheit
50 mM Tris-HCl (pH 8,3), 4 mM MgCl₂, 10 mM DTT, 50 mM KCl, 0,5 mM dTTP, 0,4 MBq/ml [³H]-dTTP, 0,4 mM Poly(A)-Oligo(dT)_12-18 und Enzym in 20 μl für 10 Min. bei 37 °C.