Invitrogen™ Vybrant™ FLICA Caspase Apoptosis Assay Kits for flow cytometry

Beschreibung

Schneller Nachweis der von Caspase-vermittelten Apoptose durch Durchflusszytometrie mit Vybrant FAM Caspase-Assay-Kits für Polycaspasen und Caspasen-3 und -7. Vybrant FAM Caspase-Assay-Kits nutzen fluoreszierende Inhibitoren der Caspasen (FLICA)-Methodik zum Nachweisen und Melden von Caspase-Aktivität. Diese Caspase-Assay-Kits enthalten speziell entwickelte FLICA-Substrate FAM-VAD-FMK (für Polycaspasen), FAM-DEVD-FMK (für Caspase-3/7) und FAM-LETD-FMK (für Caspase-8). Sie umfassen auch Hoechst 33342 und Propidiumiodid-Färbemittel, was eine gleichzeitige Bewertung der Membrandurchlässigkeit und des Zellzyklus durch Durchflusszytometrie ermöglicht.

Vybrant FAM Caspase-Assay-Kits für die Durchflusszytometrie nutzen einen neuartigen Ansatz zur Erkennung aktiver Caspasen: die FLICA-Methodik, eine Affinitätsmarkierung. Diese Affinitätsmarkierung verbindet einen Fluoromethylketon (FMK)-Anteil, der kovalent mit einem Cystein reagieren kann, mit einer caspasespezifischen Aminosäuresequenz. Verschiedene Aminosäure-Erkennungssequenzen werden zum Nachweis verschiedener Caspasen verwendet: Valin-Alanin-Asparaginsäure (VAD) für Polycaspasen (einschließlich Caspase-1, -3, -4, -5, -6, -7, -8 und -9), Asparaginsäure-Glutaminsäure-Valin-Asparaginsäure (DEVD) für Caspase-3/7 und Leucin-Glutaminsäure-Threonin-Asparaginsäure (LETD) für Caspase-8. Eine Carboxyfluorescein-Gruppe (FAM) wird als Reporter angehängt.

Das FLICA-Reagenz soll über die Erkennungssequenz mit dem enzymatischen reaktiven Zentrum einer aktivierten Caspase interagieren und dann kovalent durch den FMK-Anteil anbinden. Der FLICA-Hemmer ist membrangängig und nicht-zytotoxisch. Ungebundene FLICA-Moleküle diffundieren aus der Zelle und werden weggespült; das verbleibende fluoreszierende Signal ist ein direktes Maß für die Menge an aktiver Caspase, die zum Zeitpunkt der Zugabe des Inhibitors vorhanden war. Die ungefähren Anregungs- und Emissionsspitzen der Reagenzien FLICA, Propidiumiodid und Hoechst 33342 betragen 488 nm⁄530 nm, 535 nm⁄617 nm bzw. 350 nm⁄461 nm. Die in den einzelnen Vybrant FAM Polycaspase-Assay-, Caspase-3 und -7 Assay- und Caspase-8 Assay-Apoptose-Kits enthaltenen Nachweisreagenzien sind 488⁄530 FAM-VAD-FMK- , 488⁄530 FAM-DEVD-FMK- bzw. 488⁄530 FAM-LETD-FMK-Reagenz.