Gibco™ pOptiVEC™-TOPO™ TA Cloning™ Kit

Beschreibung

• Das OptiCHO™ Express Kit wurde für effizientes Wachstum und effiziente Transfektion von CHO (Chinese Hamster Ovary) DG44-Zellen mit Dihydrofolat-Reduktase-Mangel (DHFR) in Suspensionskulturen entwickelt.
• Das Kit enthält ein vollständiges Protokoll des Arbeitsablaufs sowie die erforderlichen Komponenten für eine effiziente Transfektion von DHFR-DG44-Zellen in einer serumfreien Umgebung und die anschließende Entwicklung stabiler Zelllinien, einschließlich:
• pOptiVEC™-TOPO™ Vektor – ein bicistronischer Klonierungsvektor, der ein DHFR-Gen für die Entwicklung stabiler Zelllinien in CHO-DG44-Zellen enthält (Abbildung 1); der Vektor ist an TOPO™ angepasst und ermöglicht das Klonieren eines PCR-Produkts, das Ihr Gen von Interesse mit > 85%iger Effizienz enthält
• Freestyle™ MAX Transfection Reagent – ein Transfektionsreagenz ohne Stoffe tierischen Ursprungs mit hoher Transfektionseffizienz und konsistenten Ergebnissen
• CD OptiCHO™ Medium – ein chemisch definiertes, proteinfreies Medium (ohne Hypoxanthin oder Thymidin), das speziell für die Suspensionszellkultur rekombinanter CHO-DG44-Zellen mit hoher Dichte und die Ausbeute an sezerniertem Protein entwickelt wurde
• CD DG44 Medium – ein chemisch definiertes, proteinfreies Medium, das mit Hypoxanthin und Thymidin ergänzt wurde, um ein optimales Wachstum von DG44-Zellen in Suspensionskulturen zu unterstützen
• DG44-Zellen – vorangepasst auf CD DG44 Medium und für überragendes Zellwachstum und Transfektionseffizienz selektiert
• Darüber hinaus enthält das OptiCHO™ Express Kit GIBCO™ OptiPRO™ SFM für eine verbesserte Bildung von DNA-Lipidkomplexen, L-Glutamin (separat für erhöhte Medienstabilität geliefert) und Pluronic™ F-68 zur Kontrolle von Scherkräften in Suspensionskulturen.
• Lagerung: Lagerung von Pluronic™ F-68 bei 15 °C bis 30 °C. Lagerung von CD DG44 Medium, OptiPRO™ SFM, CD OptiCHO™ Medium und FreeStyle™ MAX Transfection Reagent bei 2 °C bis 8 °C im Dunkeln. Lagerung von L-Glutamin, pOptiVEC™-TOPO™ Vektor, CMV-Vorwärtssequenzierungs-Primer und EMCV IRES-Rückwärtssequenzierungs-Primer bei -5 °C bis -20 °C. Lagerung von One Shot™ TOP10 Chemically Competent E. coli-Zellen bei -80 °C. Lagerung von DG44-Zellen in Flüssigstickstoff.