Invitrogen™ NativePAGE™ 3 bis 12 %, Bis-Tris, 1,0 mm, Mini-Protein-Gele

Beschreibung

Das Invitrogen NativePAGE Bis-Tris Gelsystem ist ein vorgefertigtes Polyacrylamid-Mini-Gel-System, das eine empfindliche, hochauflösende Analyse von nativen Proteinen und Proteinkomplexen für die Bestimmung der Molekülmasse und die Beurteilung der Reinheit ermöglicht. Basiert auf der blauen nativen Polyacrylamid-Gelelektrophorese (BN PAGE), die von Schägger und von Jagow entwickelt wurde und die Beschränkungen der herkömmlichen nativen Elektrophorese durch einen nahezu neutralen pH-Wert und Detergensverträglichkeit überwindet.

Das NativePAGE Bis-Tris-Gelsystem zeichnet sich durch folgende Merkmale aus:
• Großer Molekülmassenbereich, von 15 bis 10.000 kDa
• Trennung bei neutralem pH-Wert, wodurch der native Zustand von Proteinkomplexen besser erhalten bleibt
• Auflösung aller Proteine im Gel unabhängig von ihrem isoelektrischen Punkt (pI)
• Fähigkeit, Membranproteinkomplexe in ihren nativen Konformationen zu analysieren
• Fähigkeit, eine bessere Auflösung als bei der herkömmlichen Tris-Glycin-Nativ-Elektrophorese zu erhalten

Funktionsweise der NativePAGE Bis-Tris-Gele
In SDS-PAGE fungiert SDS als Lade-Verschiebungsmolekül, das Proteine denaturiert, indem es sie negativ auflädt und Proteine zur Anode migrieren lässt. BN PAGE verwendet Coomassie G-250 als Lade-Verschiebungsmolekül, das an Proteine bindet und sie negativ auflädt, während die Proteine in ihrem nicht denaturiertem, nativen Zustand verbleiben. Der fast neutrale pH-Wert des NativePAGE Bis-Tris-Gelsystems bietet maximale Stabilität sowohl der Proteine als auch der Gelmatrix, was eine hochsensitive Methode zur Analyse nativer Membran-Protein-Komplexe und eine höhere Bandauflösung als bei herkömmlichen Tris-Glycin-Gelsystemen ermöglicht.

Für die Übertragung von Proteinen auf eine Membran empfehlen wir die Verwendung von NuPAGE Transferpuffern für herkömmliche Nassübertragungen und PVDF-Membranen. Der NuPAGE Transferpuffer hält die neutrale pH-Umgebung aufrecht, die während der Elektrophorese hergestellt wird. Nitrozellulosemembranen sind nicht kompatibel mit Blotting, da die Membran den Coomassie G-250-Farbstoff sehr fest bindet. Schneller halbtrockener Transfer mit dem Invitrogen Power Blotter (PB0013) bzw. schneller trockener Transfer mit dem iBlot 2 Gel-Transfergerät (IB21001) unter Verwendung von PVDF-Membranen.