Invitrogen™ pENTR™/TEV/D-TOPO™ Cloning Kit, with One Shot™ TOP10 Chemically Competent E. coli

Beschreibung

• PCR-Produkte mit stumpfen Enden klonen mit einer Effizienz von über 90 % direktional in den pENTR/TEV/D-TOPO Entry-Vektor und umfassen eine TEV-Protease-abhängige Spaltstelle zur Entfernung von Tags am N-Terminus aus exprimierten Proteinen
• Rasches Hin- und Herschicken klonierter Gene zwischen mehreren Vektorsystemen
• Zuverlässige Leistung
• Für Zugang zum Gateway System eine PCR-Amplifikation des zu untersuchenden Gens durchführen und Produkt direkt an den mitgelieferten mit Topoisomerase geladenen pENTR/SD/D-TOPO Vektor anhängen. Danach 5 Minuten lang inkubieren und die mitgelieferten kompetenten E. coli-Zellen transformieren
• Die resultierenden attL enthaltenden Gateway Entry Klone sind für eine effiziente Rekombination bereit
• Der optimierte pENTR/TEV/D-TOPO-Vektor umfasst eine Detektionsstelle für das Tobaktab-Etch-Virus (TEV) für die proteaseabhängige Spaltung von N-terminalen Tags aus rekombinantem Protein
• Der Vektor verfügt über M13- und T7-Primer-Sequenzierstellen und attL-Rekombinationsstellen, die die PCR-Produkteinführungsstelle flankieren, sodass Klone einfach sequenzgeprüft und in eine Auswahl von Vektoren neu kombiniert werden können
• Ein Kanamycin-Resistenz-Gen und ein pUC-Ursprung dienen der Selektion und hohen Kopiepropagation in E. coli
• Ein vierbasiger Überhang auf den Vektorpaaren mit vierbasiger Sequenz im Vorwärtsprimer der PCR-Reaktion sorgt für Direktionalität hin zur Topoisomerase-Ligationsreaktion

Klonierung, Gateway-Klonierung