Invitrogen™ pENTR™/SD/D-TOPO™ Cloning Kit, with One Shot™ Mach1™-T1^R Chemically Competent E. coli

Beschreibung

• Stumpfendige PCR-Produkte klonen bei einer Effizienz von über 90 % direktional in pENTR™/SD/D-TOPO™ Entry-Vektoren und enthalten eine vorgeschaltete Shine-Dalgarno-Sequenz zur Expression in Prokaryoten
• Rasches Hin- und Herschicken klonierter Gene zwischen mehreren Vektorsystemen
• Zuverlässige Leistung
• Für Zugang zum Gateway System eine PCR-Amplifikation des zu untersuchenden Gens durchführen und Produkt direkt an den mitgelieferten mit Topoisomerase geladenen pENTR™/SD SD/SD D-TOPO Vektor anhängen. Danach 5 Minuten lang inkubieren und die mitgelieferten kompetenten E. coli-Zellen transformieren
• Die daraus resultierenden attL-Klone sind nun für eine effiziente Rekombination mit den gewünschten Vektoren bereit.
• Der pENTR™/SD SD/SD D-TOPO™ Vektor enthält einen T7-Gen-10-translationalen Enhancer und eine Ribosombindungsstelle (RBS) für die optimale Expression von nativem Protein nach Rekombination mit prokaryotischen Vektoren
• Verwenden Sie Vektor auch für die Expression in anderen Hostsystemen durch Rekombination mit verschiedenen Destination-Vektoren
• Der Vektor verfügt über M13- und T7-Primer-Sequenzierungsstellen und attL-Rekombinationsstellen, welche die PCR-Produkteinführungsstelle flankieren. Dadurch können Klone einfach sequenziert und in eine Auswahl von attR-haltigen Zielvektoren rekombiniert werden
• Ein Kanamycin-Resistenz-Gen und ein pUC-Ursprung dienen der Selektion und hohen Kopiepropagation in E. coli
• Keine PCR-Reinigung, Vektorvorbereitung oder andere zeitintensive DNA-Manipulationsschritte
• Ein vierbasiger Überhang auf den Vektorpaaren mit vierbasiger Sequenz im Vorwärtsprimer der PCR-Reaktion sorgt für Direktionalität hin zur Topoisomerase-Ligationsreaktion

Klonierung, Gateway-Klonierung