Invitrogen™ pENTR™/D-TOPO™ Cloning Kit, with One Shot™ Mach1™-T1^R Chemically Competent E. coli

Beschreibung

• Stumpfendige PCR-Produkte können direktional mit mehr als 90%iger Effizienz kloniert werden, ohne Ligase, Verfahren nach der PCR oder Restriktionsenzyme.
• Rasches Hin- und Herschicken klonierter Gene zwischen mehreren Vektorsystemen
• Zuverlässige Leistung
• Für Zugang zum Gateway System eine PCR-Amplifikation des zu untersuchenden Gens durchführen und Produkt direkt an den mitgelieferten mit Topoisomerase geladenen pENTR/D-TOPO-Vektor anhängen. Danach 5 Minuten lang inkubieren und die mitgelieferten kompetenten E. coli-Zellen transformieren
• Die daraus resultierenden Gateway Entry-attL-Klone sind nun für eine effiziente Rekombination mit den gewünschten Gateway Destination-Vektoren bereit.
• Der pENTR/D-TOPO Vektor verfügt über M13- und T7-Primer-Sequenzierstellen und attL-Rekombinationsstellen, die an die Stelle der PCR-Produkteinfügung grenzen. Dadurch können Klone einfach sequenzgeprüft und in eine Auswahl von attR-haltigen Gateway Zielvektoren rekombiniert werden
• Ein Kanamycin-Resistenz-Gen und ein pUC-Ursprung dienen der Selektion und hohen Kopiepropagation in E. coli
• Ein vierbasiger Überhang auf den Vektorpaaren mit vierbasiger Sequenz im Vorwärtsprimer der PCR-Reaktion sorgt für Direktionalität hin zur Topoisomerase-Ligationsreaktion
• Verschieben Sie dieselbe DNA-Sequenz zwischen verschiedenen Vektoren, ohne Bedarf an Restriktionsenzymen, Ligase, Subklonierungsschritten, Screening zahlloser Kolonien oder Resequenzierung

Klonierung/ Gateway Klonierung