Thermo Scientific™ FastAP wärmeempfindliche alkalische Phosphatase (1 U/μl)

Beschreibung

FastAP Thermosensitive alkalische Phosphatase katalysiert die Abgabe von 5'- und 3'-Phosphatgruppen aus DNA, RNA und Nukleotiden. Dieses Enzym entfernt zudem Phosphatgruppen aus Proteinen.

FastAP ist eine neuartige alkalische Phosphatase, die in allen Thermo Scientific Restriktionsenzympuffern und PCR-Puffern aktiv ist. Es dephosphoryliert alle Arten von DNA-Enden (stumpfe, 5'- und 3'-Überhänge) in 10 Minuten bei 37°C. Das Enzym wird in 5 Minuten bei 75°C inaktiviert. Aus diesem Grund ist es nicht mehr erforderlich, die alkalische Phosphatase vor der Ligation zu entfernen.

Besondere Eigenschaften

• Rekombinantes Enzym
• Schnelle Dephosphorylierung – 10 Minuten bei 37 °C
• Rasche und vollständige Inaktivierung – 5 Minuten bei 75 °C
• Gleichzeitiger Verdau und Dephosphorylierung von Vektor-DNA
• 100 % aktiv in Restriktionsenzym- und PCR-Puffern
• Ein Protokoll für alle Arten von DNA-Enden:
  • 5’-Überhänge
  • 3’-Überhänge
  • stumpfe Enden
  • einzelne Nukleotide
• PCR-Aufreinigung in Verbindung mit Exo I
• Protein-Dephosphorylierung

Anwendungen

• Dephosphorylierung von Vektor-DNA zur Klonierung, um eine Rezirkulation während der Ligation zu verhindern.
• Gleichzeitiger Verdau und Dephosphorylierung von Vektor-DNA
• PCR-Aufreinigung: Nukleotidabbau vor der Sequenzierung des PCR-Produkts
• Dephosphorylierung von Nukleinsäure-5'-Termini vor der Markierung mit T4 Polynukleotid-Kinase
• Andere Anwendungen, bei denen Dephosphorylierung von DNA- und RNA-Substraten erforderlich ist
• Protein-Dephosphorylierung

Hinweis

• Die Bindung von FastAP temperaturempfindlicher alkalischer Phosphatase an die DNA kann zu einem Bandensprung des Agarose-Gels führen. Um dieses zu verhindern, inkubieren Sie die Proben 10 Minuten lang mit 6X DNA-Ladefarbstoff & SDS-Lösung bei 65 °C, und kühlen Sie sie anschließend auf Eis vor Ausführung der Elektrophorese.
• FastAP temperaturempfindliche alkaline Phosphatase ist in allen Restriktionsenzympuffern aktiv und kann direkt zu der verdauten DNA hinzugefügt werden. Eine Wärme-Inaktivierung des Restriktionsenzyms vor der Dephosphorylierungsreaktion ist nicht erforderlich.