Applied Biosystems™ AmpliTaq Gold™ DNA-Polymerase mit Puffer II und MgCl₂

Beschreibung

AmpliTaq Gold DNA Polymerase with Buffer II and MgCl₂ is a chemically modified form of AmpliTaq DNA Polymerase requiring thermal activation. The modified enzyme is provided in an inactive state and upon thermal activation, the modifier is permanently released, regenerating active enzyme. The resulting hot-start PCR amplification provides increased sensitivity, specificity, and yield over conventional PCR techniques.

Die Applied Biosystems™ AmpliTaq Gold™ DNA Polymerase ist eine chemisch modifizierte Form der AmpliTaq™ DNA Polymerase. Die thermische Aktivierung des Standard Hot-Start-Enzyms erhöht die Sensitivität bei Amplifikationen von Genen mit geringer Kopienzahl. Es eignet sich gut für Templates von einer Grösse von bis zu 3 kb.
Die Platinum™ Hot-Start-Technologie ermöglicht eine hohe Spezifität für eine höhere Ausbeute. Patentierte Antikörper binden an das aktive Zentrum der Polymerase und inhibieren dadurch die Enzymaktivität bei niedrigen Temperaturen. Über 90% der Polymeraseaktivität wird im ersten Denaturierungsschritt wiederhergestellt, im Gegensatz zu anderen Hot-Start-Verfahren, wo z.B. Modifikationen an der Polymerase selbst die Wiederherstellung der kompletten Aktivität verhindern (Bild 1). Die Platinum™ Hot-Start-Methode ist besonders geeignet für PCR-Methoden mit kurzen Protokollen.
Die AccuPrime™ Taq DNA-Polymerase sorgt für eine bessere spezifische Bindung von Primern und ermöglicht dadurch eine Genauigkeit, die mit anderen Hot-Start-Enzymen nicht erreicht werden kann. Zusammen mit dem Hot-Start-Antikörper liefert das patentierte AccuPrime™ Hilfsprotein eine zusätzliche Kontrolle gegen Mispriming durch Interaktionen von Template und Primern und erleichtert dem Primer die Bindung an seine spezifische Zielsequenz. AccuPrime™ ist ideal für anspruchsvolle PCR-Applikationen, wie z.B. Multiplex-PCR: In Bild 2 wurden bis zu 20 verschiedene Targetsequenzen amplifi ziert, alle zeigten nur eine spezifische Bande.
Bild 1: Die Reaktion wurde bei 94ºC im mitgelieferten Reaktionspuffer inkubiert. Aliquots wurden zu verschiedenen Zeitpunkten genommen und in einem Standard-Aktivitätstest bewertet.
Bild 2: Jede Spur von links nach rechts zeigt die wachsende Zahl an Primer-Paaren (1 bis 20), eingesetzt in einem 50uL PCR-Reaktionsgefäss. Die PCR wurde auf Eis pipettiert, verwendet wurden 200 ng K562 humane genomische DNA und 5 units AccuPrime™ Taq DNA-Polymerase. Das Protokoll enthielt 35 Zyklen (94ºC 15 Sekunden, 60ºC 30 Sekunden, 68ºC 60 Sekunden).
Puffer I: beinhaltet bereits 15 mM MgCl2
Puffer II: mit separater 25 mM MgCl2-Lösung
Hersteller: N8080243 Art.-Nr.
Beschreibung: AmpliTaq Gold™ DNA Polymerase with Buffer II
Packung: 6 x 250 units

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