Benötigt :
Standardzentrifuge, die 5.000x g mit entweder 96-Well-Mikrotiterplatte oder Mikrofugenröhrchen-Adapter, 96-Well-Mikrotiterplatte oder Mikrofugenröhrchen-Vortexer, Blutröhrchen, reverse Transkriptionsreagenzien für die cDNA-Synthese und TaqMan™ Mastergemische für die Echtzeit-PCR-Analyse verarbeiten kann
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Das Stabilized Blood-to-CT™ Nukleinsäure-Vorbereitungskit für qPCR ermöglicht die Durchführung einer Expressionsanalyse direkt aus 500 μl Aliquot humanen Vollbluts, das in PAXgene™- oder Tempus™ Blood RNA Röhrchen ohne konventionelle RNA-Aufreinigung entnommen wurde. Dieses einfache Verfahren erzeugt ein Lysat, das direkt in die reverse Transkription und die Echtzeit-PCR mit der Empfindlichkeit und Spezifität wechseln kann, die konventionell gereinigter RNA entspricht. Dieses Kit spart Zeit, erzeugt weniger Abfall und überzeugt durch einen einfachen Arbeitsablauf, der für geringere Probenmengen geeignet ist, sich aber auch problemlos in automatisierte Anwendungen mit hohem Durchsatz integrieren lässt. Einfacher Arbeitsablauf ohne Einbußen bei der Empfindlichkeit und Spezifität Der Prozess beinhaltet das Pelletieren und Waschen eines 500 μl-Aliquots aus dem Blutentnahmeröhrchen, gefolgt von einem einzigartigen Verdau-/DNase-Schritt, bei dem die Integrität der RNA erhalten bleibt. Die Zubereitung erfolgt vollständig bei Raumtemperatur, im Gegensatz zu anderen Produkten, die temperaturspezifische Inkubationsschritte erfordern. Bis zu 96 Proben können in weniger als einer Stunde vorbereitet werden; d. h. in der Hälfte der Zeit, die für eine wettbewerbsfähige Zentrifugensäulen-Aufreinigung erforderlich ist, um nur 12 Proben zu verarbeiten, und dabei gibt es weniger Arbeitsaufwand. Das resultierende Lysat kann direkt in ein- oder zweistufige qRT-PCR-Reaktionen übergehen oder zur späteren Verwendung gelagert werden (1 Stunde bei 4 °C oder 5 Monate eingefroren). Dieses einfache Verfahren findet in dem gleichen Probenverarbeitungs-Well von Anfang bis Ende statt, d. h. es erfolgt keine Probenübertragung. Reagenzien zur reversen Transkription für die cDNA-Synthese, TaqMan Master Mixe und TaqMan Assays für die Echtzeit-PCR-Analyse sind separat erhältlich.
Die Gesamtzahl der Reverse-Transkription- und PCR-Reaktionen, die von einer Ausgangsprobe möglich sind, hängt von den Mindestanforderungen an die Proben der gewünschten RT-PCR-Kits ab. Weitere Informationen finden Sie in der Benutzerdokumentation. Screening, Entdeckung oder Validierung Für Anwender, die spezifische Gene untersuchen möchten, wurde das Stabilized Blood-to-CT Nukleinsäure-Vorbereitungskit für qPCR entwickelt, das ein schnelles Screening aus einer kleinen Menge einer Ausgangsprobe (ca. 5 % des Gesamtvolumens eines ordnungsgemäß gefüllten PAXgene oder Tempus Blut-RNA-Röhrchens pro Probe) ermöglicht. Der Rest des Blutröhrchens kann zur späteren Verwendung archiviert oder bei Bedarf gereinigt werden. Wer Entdeckungs- oder Validierungsversuche mit Echtzeit-PCR-Analyse durchführen möchte, spart mit dem Stabilized Blood-to-CT Nukleinsäure-Vorbereitungskit für qPCR Aufwand, Zeit und Gesamtkosten. Gleichzeitig bietet es einen skalierbaren Prozess, mit dem Labore, die durch herkömmliche Aufreinigungsverfahren Engpässe erlebten, ihre Proben nun mühelos verarbeiten können. miRNA-Analyse Angesichts des zunehmenden Fokus auf nicht-codierender RNA und ihrer steuernden Funktion bei der Entwicklung von Krankheiten ist es beruhigend zu wissen, dass diese kleinen und doch so wichtigen RNA-Moleküle mit dem Stabilized Blood-to-CT Nukleinsäure-Vorbereitungskit für qPCR zuverlässig erkannt werden können. Das Lysat wurde mit dem Applied Biosystems TaqMan MicroRNA Reverse Transcription Kit und dem TaqMan Universal Master Mix II an einem weiten Panel von TaqMan microRNA-Assays wissenschaftlich geprüft und generierte Ergebnisse von mindestens der Qualität von Aufreinigungsprodukten führender Mitbewerber. Umweltschonender und abfallsparender für höhere Kostenersparnis Die Produkte von Wettbewerbern, gerade säulenbasierte Methoden, generieren erhebliche Mengen von Kunststoff- und biogefährdendem Abfall für jede Probe (Spin-Säulen, Spitzen, Mikrozentrifugenröhrchen, Reagenzien). Das Stabilized Blood-to-CT Nukleinsäure-Vorbereitungskit für qPCR vereinfacht den Arbeitsablauf und reduziert so den gesamten Kunststoffabfall um 75 % nach Gewicht, wobei eine vergleichbare Anzahl von Proben über Säulen verarbeitet wird. Das Kit erzeugt keinen organischen Abfall. Außerdem ist die Stellfläche platzsparend, um die Kapazität des Gefriergeräts zu maximieren. Weniger Entsorgung gefährlicher Abfälle und ein geringerer Kunststoffverbrauch führen zu Kosteneinsparungen – und einer Verringerung der Umweltbelastung.
Nachweis der Gesamt-RNA aus PAXgene (einschließlich miRNA) oder Tempus Blood RNA-Röhrchen ohne Aufreinigung
Fast — Vorbereiten von 96 Proben für TaqMan-basierte Echtzeit-RT-PCR in weniger als 1 Stunde
Robust — 500 μl-Probe, die bei Raumtemperatur verarbeitet wird und deren Ergebnisse denen von gereinigter RNA entspricht
Flexibles Format — Proben können in Mikrofugenröhrchen oder manuellen/automatisierten 96-Well-Mikrotiterplatten vorbereitet werden
Kompatibel mit 1-Schritt,- 2-Schritt-qRT-PCR und automatisierten Protokollen, kompatibel mit hohem Durchsatz
Die aus dem Lysat generierten Echtzeit-PCR-Daten entsprechen den Ergebnissen aus konventionell gereinigter RNA aus denselben Röhrchen und wurden mit den folgenden qPCR-Reagenzien validiert:
Applied Biosystems High Capacity RNA-to-cDNA Kit und TaqMan Genexpression-Master-Mix
Invitrogens SuperScript™ VILO™ cDNA-Synthesekit und TaqMan Genexpression-Master-Mix
Applied Biosystems TaqMan MicroRNA Kit zur reversen Transkription und TaqMan Universal Master Mix II
Kompatibilität – PAXgene oder Tempus Blood RNA-Röhrchen
Verarbeitungszeit — unter 1 Stunde
Format — Mikrofugenröhrchen, 96-Well-Mikrotiterplatten
Anzahl der Preps — 50 Reaktionen
Für Anwender, die eine vollständige Reinigung benötigen:Wenn die herkömmliche RNA-Reinigung für das Restblutröhrchen weiterhin erforderlich ist, ist das MagMAX RNA-Isolierungskit für stabilisierte Blutentnahmeröhrchen eine Option. Dieses Produkt maximiert den Ertrag der Gesamt-RNA aus PAXgene (einschließlich miRNA) oder Tempus Blood RNA-Röhrchen mit Hilfe eines magnetpulverbasierten Trennverfahrens.
Aufreinigung und Analyse von DNA und RNA, qRT-PCR in einem Schritts, PCR und Real-Time PCR, RNA-Extraktion, Echtzeit-PCR (qPCR), Echtzeit-PCR direkt aus Proben, Vollstände RNA-Isolation, Gesamt-RNA aus Blut, qRT-PCR in zwei Schritten
PAXgene™ und PreAnalytiX™ sind eingetragene Marken der PreAnalytiX GmbH. Hier ist keine finanzielle Unterstützung, Billigung oder Zugehörigkeit impliziert.
Kit-Komponenten: Box 1 (bei 4 °C lagern): • Verdaulösung 5 ml • Tempus™ Pellet Enhancer 1 ml • Tempus™ Wasch. Nr. 1 37,5 ml • Tempus™ Wasch. Nr. 2 37,5 ml • 2X PBS für Tempus™ 12,5 ml • PAXgene™ Wasch. 75 ml
Box 2 - Bei -20 °C lagern • Stopplösung 0,5 • DNase 1 50 µl
< 1 h
Lysat
1- oder 2-stufige qRT-PCR
50 Präp.
50 preps
Rörchen, 96-Well-Platten
Blut
Kompatibel mit hohem Durchsatz, nicht kompatibel mit hohem Durchsatz (manuell), automatisierte Protokolle
Weniger verbrauchte Ressourcen, weniger Abfall und weniger gefährlich
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