Molecular Probes™ Alexa Fluor™ 488 NHS-Ester (Succinimidylester)

Beschreibung

Alexa Fluor™ 488 ist ein heller, grün fluoreszierender Farbstoff mit einer Anregung, die sich ideal für den 488 nm-Laser eignet. Der Farbstoff Alexa Fluor™ 488 ist wasserlöslich und pH-unempfindlich im Bereich von pH 4 bis pH 10 und wird für eine stabile Signalerzeugung in der Bildgebung und Durchflusszytometrie verwendet. Zusätzlich zu reaktiven Farbstoffformulierungen bieten wir den Farbstoff Alexa Fluor™ 488 konjugiert mit einer Vielzahl von Antikörpern, Peptiden, Proteinen, Markierungssubstanzen und Amplifikationssubstraten, die für die Markierung und den Nachweis von Zellen optimiert wurden, an.

Der NHS-Ester (oder Succinimidylester) von Alexa Fluor™ 488 ist die am häufigsten verwendete Substanz, um den Farbstoff mit einem Protein oder Antikörper zu konjugieren. NHS-Ester können zur Markierung der primären Amine (R-NH₂) von Proteinen, Amin-modifizierten Oligonukleotiden und weiteren Amin-haltigen Molekülen verwendet werden. Das entstehende Konjugat mit Alexa Fluor™ zeigt eine hellere Fluoreszenz und höhere Photostabilität als Konjugate mit anderen Fluorophoren mit ähnlichem Spektrum.

Ausführliche Informationen zu diesem Alexa Fluor™ NHS-Ester:
Fluorophor-Markierung: Alexa Fluor™ 488 Farbstoff
Reaktive Gruppe: NHS-Ester
Reaktivität: Primäre Amine auf Proteinen und Liganden, Amin-modifizierte Oligonukleotide
Ex/Em des Konjugats: 494/517 nm
Extinktionskoeffizient: 73.000 cm-1M-1
Farbstoffe mit ähnlichem Spektrum: FITC, Oregon Green 488
Molekulargewicht: 643,4

Typische Konjugationsreaktion
Aminreaktive Farbstoffe können mit praktisch jedem Protein oder Peptid konjugiert werden (das bereitgestellte Protokoll ist für IgG-Antikörper optimiert). Sie können die Reaktion auf beliebige Proteinmengen skalieren, optimale Ergebnisse erzielen Sie jedoch bei einer Proteinkonzentration von mindestens 2 mg/ml. Wir empfehlen Versuche mit drei verschiedenen Markierungsgraden unter Verwendung von drei unterschiedlichen molaren Verhältnissen von reaktivem Reagenz zu Protein.

Der Alexa Fluor™ NHS-Ester ist in der Regel in hochwertigem wasserfreiem Dimethylformamid (DMF) oder Dimethylsulfoxid (DMSO) (D12345) aufgelöst. Die Reaktion erfolgt in 0,1–0,2 mol Natriumbikarbonat-Puffer, pH 8,3, bei Raumtemperatur für 1 Stunde. Da der pKa-Wert des Amino-Terminus niedriger ist als der der epsilon-Aminogruppe des Lysin, erreichen Sie möglicherweise eine stärker selektive Markierung des Amino-Terminus mit einem Puffer, der näher am neutralen pH-Wert liegt.

Konjugat-Aufreinigung
Markierte Antikörper werden in der Regel von freiem Alexa Fluor™ Farbstoff durch Einsatz einer Gel-Filtrationssäule wie Sephadex™ G-25, BioGel™ P-30 oder Ähnlichem getrennt. Wählen Sie bei sehr großen bzw. kleinen Proteinen ein Gelfiltrationsmedium mit geeigneter molekularer Ausschlussgrenze (MWCO), oder entscheiden Sie sich für eine Reinigung per Dialyse. Wir bieten verschiedene Reinigungskits, die für unterschiedliche Mengen von Antikörperkonjugat optimiert sind:
Antikörperkonjugat-Aufreinigungskit für 0,5 – 1 mg (A33086)
Antikörperkonjugat-Aufreinigungskit für 20 – 50 μg (A33087)
Antikörperkonjugat-Aufreinigungskit für 50 – 100 μg (A33088'>A33088)

Weitere Informationen zur Protein- und Antikörpermarkierung
Wir bieten eine breite Auswahl an Molecular Probes™ Antikörper- und Proteinmarkierungskits, passend zu Ihrem Ausgangsmaterial und Ihrer Experimentanordnung. Weitere Optionen finden Sie unter Antikörper-Markierungskits, oder nutzen Sie unser Auswahlwerkzeug für die Markierungschemie. Um mehr über unsere Markierungskits zu erfahren, lesen Sie Kits for Labeling Proteins and Nucleic Acids, Abschnitt 1.2 im Handbuch von Molecular Probes™.

Bestellen Sie ein individuelles Konjugat
Sollten Sie in unserem Bestandsverzeichnis nicht das Passende finden, erstellen wir Ihnen gern ein Antikörperkonjugat nach Ihren individuellen Vorgaben. Unser individualisierter Konjugationsservice arbeitet effizient und absolut vertraulich, und wir verbürgen uns für die Qualität unserer Arbeit. Wir sind ISO 9001:2000 zertifiziert.