Molecular Probes™ Alexa Fluor™ 488 C₅ Maleimid

Beschreibung

Alexa Fluor™ 488 C₅ Maleimide ein heller, grüner Fluoreszenzfarbstoff mit einer Erregung, die sich hervorragend für 488 nm-Laser eignet. Der Farbstoff Alexa Fluor™ 488, der für eine stabile Signalerzeugung in der Bildgebung und Durchflusszytometrie verwendet wird, ist wasserlöslich und pH-unempfindlich im Bereich von pH 4 bis pH 10. Zusätzlich zu reaktiven Farbstoffformulierungen bieten wir Alexa Fluor™ 488 an, der mit einer Vielzahl von Antikörpern, Peptiden, Proteinen, Tracern und Amplifikationssubstraten konjugiert und für die Markierung von Zellen und deren Nachweis optimiert ist.

Das Maleimidderivat von Alexa Fluor™ 488 ist das beliebteste Hilfsmittel für die Konjugierung dieses Farbstoffs mit einem Protein oder Antikörper. Die daraus resultierenden Alexa Fluor™ 488 Konjugate weisen eine hellere Fluoreszenz und höhere Photostabilität auf als die Konjugate anderer spektral ähnlicher Fluorophore.

Ausführliche Informationen zu diesem AlexaFluor™ Maleimide:
Fluorophor-Markierung: Alexa Fluor™ 488 Farbstoff
Reaktive Gruppe: Maleimid
Reaktivität: Thiolgruppen an Proteinen und Liganden, Oligonukleotid-Thiophosphaten
Anregungs-/Emissionsmaxima (Ex/Em) des Konjugats: 493/516 nm
Extinktionskoeffizient: 72.000 cm-1M-1
Spektral ähnliche Farbstoffe: Fluorescein (FITC), Cy™2
Molekulargewicht: 720,66

Typische Konjugationsreaktion
Das Protein sollte bei einer Konzentration von 50 bis 100 μM in einem geeigneten Puffer (10 bis 100 mM Phosphat, Tris oder HEPES) bei pH-Wert 7,0 bis 7,5 aufgelöst werden. In diesem pH-Bereich sind die Thiolgruppen des Proteins so nukleophil, dass sie trotz zahlreich vorhandener Proteinamingruppen, die protoniert und relativ unreaktiv sind, fast ausschließlich mit dem Reagenz reagieren. Wir empfehlen, an diesem Punkt jegliche Disulfidbrücken mit einem Reduktionsmittel des 10-fachen molaren Überschusses wie DTT oder TCEP zu reduzieren. Überschüssiges DTT muss durch Dialyse entfernt werden. Nachfolgende Thiol-Modifikationen sollten unter sauerstofffreien Bedingungen durchgeführt werden, um eine Neubildung der Disulfid-Verbindungen zu verhindern. Diese Vorsichtsmaßnahmen sind bei der Verwendung von TCEP vor der Maleimid-Konjugation nicht erforderlich.

Das Alexa Fluor™-Maleimid wird in der Regel unmittelbar vor der Verwendung in hochwertigem, wasserfreiem Dimethylsulfoxid (DMSO) mit einer Konzentration von 1 bis 10 mM aufgelöst, und Stammlösungen sollten möglichst vor Licht geschützt werden. Im Allgemeinen wird diese Stammlösung der Proteinlösung tropfenweise unter Rühren hinzugefügt, um rund 10 bis 20 Mol Reagenz pro Mol Protein zu erzielen. Die Reaktion kann bei Raumtemperatur für 2 Stunden oder bei 4 °C über Nacht und vor Licht geschützt erfolgen. Alle unreagierten thiolreaktiven Reagenzien können durch Hinzufügen von überschüssigem Glutathion, Mercaptoethanol oder anderem löslichen niedermolekularen Thiol verbraucht werden.

Konjugierte Aufreinigung
Markierte Antikörper werden normalerweise mit einer Gelfiltrationssäule wie Sefadex™ G-25, Biogel™ P-30 oder einem gleichwertigen Produkt von freiem Alexa Fluor™ Farbstoff getrennt. Wählen Sie bei sehr großen bzw. kleinen Proteinen ein Gelfiltrationsmedium mit geeigneter molekularer Ausschlussgrenze (MWCO) oder entscheiden Sie sich für eine Reinigung per Dialyse. Wir bieten verschiedene Aufreinigungskits, die für unterschiedliche Mengen von Antikörperkonjugat optimiert sind:
Antikörperkonjugat-Aufreinigungskit für 0,5 bis 1 mg (A33086)
Antikörperkonjugat-Aufreinigungskit für 20 bis 50 μg (A33087)
Antikörperkonjugat-Aufreinigungskit für 50 bis 100 μg (A33088)

Weitere Informationen zur Protein- und Antikörpermarkierung
Wir bieten eine breite Auswahl an Molecular Probes™ Kits zur Markierung von Antikörpern und Proteinen an, die zu Ihrem Ausgangsmaterial und Ihrer Versuchsanordnung passen. Weitere Optionen finden Sie unter Antikörpermarkierungskits oder nutzen Sie unser Auswahlwerkzeug für die Markierungschemie. Weitere Informationen zu unseren Kennzeichnungskits finden Sie unter Kits for Labeling Proteins and Nucleic Acids—Kapitel 1.2 im Molecular Probes™-Handbuch.


Wenn Sie in unserem Online-Katalog das Gesuchte nicht finden, erstellen wir gern für Sie ein Antikörper- oder Proteinkonjugat nach Ihren individuellen Vorgaben. Unser individualisierter Konjugationsservice arbeitet effizient und absolut vertraulich, und wir verbürgen uns für höchste Qualität. Wir sind nach ISO 9001:2000 zertifiziert.